蛋白生物標志物已成為神經科學研究的核心，尤其在神經退行性疾病和神經炎癥病癥的治療靶點開發方面。酶聯免疫吸附試驗 (ELISA) 作為蛋白生物標志物的主要檢測技術，雖具備良好的特異性和穩健性，但傳統ELISA技術在實際應用中仍存在操作繁瑣、耗時長、重復性有限、樣本需求量大以及僅能單因子檢測等局限。鑒于此，ProteinSimple開發了全自動免疫分析平臺 Ella，集全自動化、快速、高靈敏、多因子分析能力于一體，讓生物標志物檢測更快！更準！更省心！

采用 Ella全自動免疫分析平臺定量檢測血漿和CSF中pTau-217的含量。結果表明，這種新型免疫檢測法可作為一種靈敏、精確、快速且易于使用的研究方法，用于檢測生物流體中的 pTau-217 蛋白。

01. 動態范圍和定量限

圖1. pTau-217卡盒標準曲線和動態范圍

在多個檢測卡盒及不同批次卡盒上運行曲線時，定量限(LOQ) 內的所有點回收率均在80%-120% 之間，且變異系數 (CV) 低于 20%。

通過對含有 pTau - 217的血漿樣本進行系列稀釋，樣本中抗原水平分別高于和低于定量下限 (LLOQ) 閾值，從而對定量下限進行進一步確認。結果顯示，在定量限范圍內的所有樣本，回收率均在 80% 至 120% 之間，變異系數 (CV) ≤20% 。

02. 檢測性能

(1) 精確度

圖3. pTau-217卡盒檢測精確度

左圖：將低濃度和高濃度的對照樣本在三個不同批次的Ella卡盒中重復檢測 (n=6) 。結果顯示，批間變異系數CV均 ≤5%，該檢測平臺的批內精確度高。右圖：由多名操作人員使用2個批次多個檢測卡盒以及多臺Ella分析儀，對高濃度 (紅色) 和低濃度 (藍色) 的對照樣本進行制備和檢測。結果顯示，批間精確度高 (變異系數 CV≤12%) 。

(2) 批次間一致性

圖4. pTau-217卡盒檢測批次間可重復性

通過在兩個獨立批次的卡盒上運行檢測濃度值在檢測范圍內的不同樣本，來評估卡盒批次間的重現性。結果表明，通過Bland-Altman分析 (左圖) 和線性回歸分析 (右圖) ，不同批次卡盒的檢測濃度值具有可接受的等效性。

(3) 線性稀釋和摻入回收

圖5. 血漿和CSF樣本線性稀釋回收

所有血漿和腦脊液樣本均表現出良好的線性回收，平均回收率均在80%到120%之間 (血漿的平均回收率為100%，腦脊液的平均回收率為94%) 。

圖6. 血漿和CSF樣本摻入回收

準確性通過在血漿和腦脊液中進行摻入回收實驗評估，使用三種不同濃度 (高/中/低濃度) 的摻入分析物來評估。結果發現，添加了 EDTA 的血漿樣本回收率為89%，而腦脊液樣本的平均回收率為127%。

03. 臨床樣本檢測

圖7. pTau-217在健康供體和AD患者血漿和腦脊液中的檢測

血漿 (左側) 和腦脊液 (右側) 中的pTau-217水平在健康供體與臨床診斷的阿爾茨海默病患者之間進行了比較。與健康對照組及ATN陰性患者相比，ATN陽性患者 (ATN+) 在血漿和腦脊液中的pTau-217顯著升高。在比較ATN+和淀粉樣蛋白陽性 (A+) 患者組時，也發現了腦脊液pTau水平的顯著差異。統計分析使用了Kruskal-Wallis檢驗，隨后進行了Dunn’s多重比較事后檢驗。

04. 多平臺檢測一致性

圖8. Ella平臺與Simoa平臺平行評估血漿中pTau-217含量

圖9. 二種檢測平臺的相關性

上圖：使用 Simple Plex pTau - 217 ALZpath 檢測法與基于微珠的平臺 (Simoa pTau - 217 ALZpath 檢測法) 并行測量血漿 pTau - 217 含量比較。兩種平臺均顯示，在阿爾茨海默病 (AD) 患者樣本 (ATN 表型) 中，pTau - 217 水平顯著升高 (p < 0.001)。下圖：兩種平臺的相關性分析。

綜上結果表明，這種新型免疫檢測法Ella可作為一種靈敏、精確、快速且易于使用的研究方法，用于測量生物樣本中的pTau - 217蛋白含量。

Ella神經退行性疾病的分析指標清單

更多指標可訪問：Neuroscience Assays for Ella | Bio-Techne

* 本文轉載自「ProteinSimple」微信公眾號

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